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病毒

更新時(shí)間：2013-05-27   點(diǎn)擊次數(shù)：2207次

目的建立風(fēng)疹病毒RNA TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法,制備風(fēng)疹病毒RT-PCR擴(kuò)增子作為該方法的參考標(biāo)準(zhǔn)品。方法設(shè)計(jì)引物與探針,優(yōu)化PCR條件,建立風(fēng)疹病毒RNA實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法,并制備風(fēng)疹RT-PCR擴(kuò)增子作為該方法的參考標(biāo)準(zhǔn)品。結(jié)果制備的風(fēng)疹特異性擴(kuò)增子參考標(biāo)準(zhǔn)品為503 bp的片斷,原液濃度為2.75×109copies/μl,純度為92%;采用該特異性擴(kuò)增子參考標(biāo)準(zhǔn)品建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r為-0.9993（r2=0.9986）,P<0.001。結(jié)論本研究建立的風(fēng)疹特異性擴(kuò)增子參考標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定性好,純度高;特異性擴(kuò)增子參考標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)值與Ct值之間具有良好的線性關(guān)系,證實(shí)了本研究建立的風(fēng)疹RNATaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法定量的準(zhǔn)確性。因而,建立的風(fēng)疹RNA實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法簡(jiǎn)便快捷、定量準(zhǔn)確,可用于臨床標(biāo)本中風(fēng)疹RNA的定量檢測(cè)。